Справочник по основным операциям > Градуировка > Методы градуировки > Метод внутреннего стандарта
____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Основной причиной ошибок определения концентрации компонента в пробе является вариация количества компонента, достигающего детектора, от анализа к анализу. Это происходит из-за изменения объема пробы от ввода к вводу (даже в случае использования очень хорошего автосамплера), а также из-за различия потерь компонентов во время пробоподготовки и хроматографического разделения. На стадии получения градуировки эти причины приводят к дополнительным погрешностям (как случайным, так и систематическим) определения градуировочных коэффициентов.
Метод Внутреннего стандарта позволяет учесть упомянутые выше источники ошибок и увеличить точность и воспроизводимость результатов количественного анализа за счет привлечения дополнительной, априорной информации о концентрации и отклике детектора для одного из компонентов пробы, называемого внутренним стандартом, или стандартным компонентом. Такая информация может быть использована как при выполнении градуировки (градуировка с использованием метода Внутренний стандарт), так и для расчета концентраций компонентов в исследуемых образцах (см. раздел Анализ пробы неизвестного состава/Количественное измерение концентрации компонентов/Определение относительной концентрации компонентов (расчет методом внутреннего стандарта)).
Используемый в программе МультиХром метод Внутренний стандарт [2] отличается от "классического" метода внутреннего стандарта [3] (более подробно см. Метод внутренего стандарта).
Градуировочная кривая в методе Внутренний стандарт для всех компонентов создается так же, как и в методе Внешний стандарт, но для всех компонентов, кроме одного, выбранного в качестве стандартного, производится корректировка объема каждой вводимой пробы с учетом заявленной концентрации стандартного компонента в градуировочной пробе:
,
где s – номер компонента-стандарта. Градуировку для стандартного компонента обычно проводят с помощью набора тех же градуировочных смесей, что и для остальных компонентов, при этом аппроксимация полиномом выполняется также, как для метода Внутренний стандарт. Для всех остальных компонентов процедура аппроксимации выполняется с использованием скорректированных значений количества введенного вещества:
.
Если градуировочный график стандарта неизвестен, то принимается, что он имеет линейный характер, проходит через начало координат и Фактор отклика для него равен единице (см. раздел Процедура градуировки: первый этап/Таблица компонентов). Это приводит к тому, что система ведет себя аналогично "классической" градуировке с помощью метода Внутреннего стандарта и рассчитывает относительные коэффициенты отклика детектора. Если зависимость линейна, этот подход обеспечивает правильные величины Относительной концентрации, Нормированной относительной концентрации и Нормированной концентрации. Вычисленные значения абсолютной концентрации в этом случае не имеют смысла (об этих величинах см. раздел Отчет/Таблица пиков).
AИспользование метода внутреннего стандарта для градуировки существенно улучшает воспроизводимость анализа и точность получения относительных коэффициентов отклика компонентов.
Погрешность определения абсолютных концентраций в этом случае будет определяться, в первую очередь, погрешностью градуировочной зависимости стандартного компонента, полученной методом Внешний стандарт.